EXNER EXcell 231在線近紅外吸收傳感器---通過(guò)持續(xù)監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度實(shí)現(xiàn)最佳生產(chǎn)結(jié)果

細(xì)胞培養(yǎng)和微生物在現(xiàn)代制藥和生物技術(shù)的開(kāi)發(fā)過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。由于它們對(duì)外部影響非常敏感，因此在繁殖過(guò)程中必須精確管理和監(jiān)測(cè)工藝條件。這包括溫度、pH 值或溶解氧等。細(xì)胞密度是最重要的過(guò)程特征之一，可以根據(jù)培養(yǎng)基的光學(xué)密度來(lái)確定。

當(dāng)復(fù)雜的活性成分無(wú)法通過(guò)化學(xué)合成用于制藥生產(chǎn)時(shí)，就會(huì)使用生物技術(shù)工藝。在這里，例如通過(guò)使用轉(zhuǎn)基因生物來(lái)生產(chǎn)單克隆抗體或其他重組蛋白。根據(jù)后續(xù)用途以及所需的翻譯后修飾或蛋白質(zhì)折疊等因素，可以使用細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等。活性成分的復(fù)雜性通常與過(guò)程的復(fù)雜性和脆弱性直接相關(guān)。即使是微小的變化也可能對(duì)獲得的物質(zhì)的性質(zhì)和有效性產(chǎn)生重大影響。因此，生物制藥工藝屬于活性成分生產(chǎn)中具有挑戰(zhàn)性的工藝之一。

當(dāng)我們考慮所有必要的生產(chǎn)步驟時(shí)，上游工藝尤其具有特殊的重要性。在這里，細(xì)胞的培養(yǎng)及其隨后的繁殖是通過(guò)批量、補(bǔ)料分批或灌注工藝等方式在生物反應(yīng)器中完成的。為了生產(chǎn)出盡可能多的所需物質(zhì)并達(dá)到適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量，生物反應(yīng)器中的條件必須進(jìn)行最佳調(diào)整。這里最重要的參數(shù)包括溫度、pH 值、攪拌速率以及培養(yǎng)基濃度和溶解氧等。

基于光學(xué)密度測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)

光學(xué)密度可以通過(guò)吸收測(cè)量等方式來(lái)確定，它是細(xì)胞培養(yǎng)成功繁殖的指標(biāo)。在這里，將一束光引入培養(yǎng)基中，并通過(guò)檢測(cè)器來(lái)確定光的損失。這里發(fā)射光的減少與實(shí)際細(xì)胞密度直接相關(guān)。由于目標(biāo)蛋白的體積通常由細(xì)胞數(shù)量決定，因此它是最重要的過(guò)程特征之一。它用于確定進(jìn)料的時(shí)間、改變碳源、誘導(dǎo)或收獲的時(shí)間。還可以通過(guò)光學(xué)密度計(jì)算稀釋率。

為了實(shí)現(xiàn)對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)最佳的吸收并排除顏色影響，通常使用近紅外（NIR）波長(zhǎng)的傳感器來(lái)測(cè)定細(xì)胞密度。在這里，所有散射或吸收光的顆粒都會(huì)被檢測(cè)到。除了活細(xì)胞外，還包括死細(xì)胞和細(xì)胞碎片。然而，上述類(lèi)型的傳感器已被證明在生長(zhǎng)階段特別有效，能夠提供可靠的值，因?yàn)樗梢钥焖偾胰菀椎貙?shí)現(xiàn)在線測(cè)量。早期檢測(cè)可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)減少的過(guò)程變化也是光學(xué)密度測(cè)量的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)。

在實(shí)驗(yàn)室和后續(xù)生產(chǎn)過(guò)程中持續(xù)監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度

然而，為了能夠從光學(xué)密度測(cè)量的優(yōu)勢(shì)中受益，在開(kāi)發(fā)過(guò)程中必須已經(jīng)建立與其他測(cè)量值（如細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞干重）的相關(guān)性。介電光譜法是另一個(gè)例子。通過(guò)這種方法，可以確定介電常數(shù)，也稱為介電電導(dǎo)率或介電函數(shù)。由于活細(xì)胞具有儲(chǔ)存電荷的能力，介電常數(shù)的變化可以推斷出有缺陷或死亡的細(xì)胞。因此，與光學(xué)密度測(cè)量相比，介電光譜法提供了關(guān)于活細(xì)胞數(shù)量的信息。

在許多開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室中，以及在一定程度上在下游生產(chǎn)過(guò)程中，光學(xué)密度通常只是“離線"測(cè)定，以便得出關(guān)于過(guò)程進(jìn)展或細(xì)胞生長(zhǎng)的結(jié)論。這意味著員工必須在規(guī)定的時(shí)間手動(dòng)取樣以進(jìn)行分析。在這些時(shí)間間隔之間，或者如果沒(méi)有員工在場(chǎng)（例如夜間），由于沒(méi)有進(jìn)行過(guò)程監(jiān)測(cè)，可能會(huì)丟失有價(jià)值的數(shù)據(jù)。此外，由于從過(guò)程中取出并在生物反應(yīng)器外進(jìn)行分析，也無(wú)法排除樣本可能受到污染的可能性。

對(duì)所有關(guān)鍵和質(zhì)量相關(guān)參數(shù)的持續(xù)且不間斷的監(jiān)測(cè)和控制是生物過(guò)程開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵要素。只有通過(guò)正確調(diào)整這些參數(shù)，才能創(chuàng)造出細(xì)胞能夠最佳生長(zhǎng)的環(huán)境。為了提高產(chǎn)品質(zhì)量和過(guò)程性能，越來(lái)越多地使用允許持續(xù)原位監(jiān)測(cè)和記錄所有必要數(shù)據(jù)的傳感器和測(cè)量?jī)x器，這些儀器也可以用于后續(xù)生產(chǎn)過(guò)程。因此，可重復(fù)性顯著提高，過(guò)程產(chǎn)量也有所增加。如果使用相同的傳感器和測(cè)量?jī)x器，那么在實(shí)驗(yàn)室中使用的測(cè)量技術(shù)與安裝在過(guò)程中的測(cè)量技術(shù)之間繁瑣的相關(guān)性就可以避免。

用于測(cè)定細(xì)胞密度的測(cè)量探頭的要求

由于生物制藥工藝是非常具有挑戰(zhàn)性的工藝，對(duì)外部影響非常敏感，因此組件（例如生物反應(yīng)器、攪拌器和測(cè)量探頭）的高質(zhì)量至關(guān)重要。除了所選材料（通常是不銹鋼）之外，相關(guān)表面（在不銹鋼的情況下，其粗糙度深度非常低，并且通常經(jīng)過(guò)電拋光）也是關(guān)鍵因素。

通過(guò)盡可能無(wú)間隙的設(shè)計(jì)來(lái)有效防止培養(yǎng)基受到污染，從而減少死空間。所有由設(shè)計(jì)所需的凹陷和倒角，特別是那些與培養(yǎng)基接觸的區(qū)域，也應(yīng)易于清潔。如今，用于測(cè)量的儀器通常是 CIP/SIP 兼容的，并且可以進(jìn)行高壓滅菌。

通過(guò)持續(xù)檢測(cè)和記錄吸收值，測(cè)量探頭提供了最新的細(xì)胞生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)。也不需要進(jìn)行樣本制備，例如稀釋樣本。因此可以避免數(shù)據(jù)提供過(guò)程中的錯(cuò)誤。在過(guò)程中，測(cè)量探頭不需要重新校準(zhǔn)，并且提供無(wú)漂移的信號(hào)。收集的數(shù)據(jù)易于解釋?zhuān)虼瞬恍枰魏翁厥馓幚?。然而，無(wú)法建立與通過(guò)傳統(tǒng)方法（如細(xì)胞干重或細(xì)胞計(jì)數(shù)）收集的測(cè)量值的相關(guān)性。由于上述設(shè)計(jì)，探頭可以輕松地與生物反應(yīng)器一起安裝和驗(yàn)證。